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細胞破碎技術的非機械法詳解
時間:2012-2-29 16:06:21來源:未知 作者:admin 點擊:365,1,0次
細胞破碎技術目前已發展了多種,以便適應不同用途和不同類型的細胞壁破碎。 破碎方法可規納為機械法和非機械法兩大類。如下介紹的是非機械法的分類:

1:化學破碎法
      采用化學法處理可以溶解細胞或抽提胞內組分。常用酸、堿、表面活性劑和有機溶劑等化學試劑

2:去垢劑破碎法
      蛋白質復性利用包含體與細胞碎片的密度差,用離心法將包含體與細胞碎片和可溶性蛋白質分開,獲得了干凈的包含體,再對包含體溶解復性。這樣首先就擺脫了大量的雜蛋白、核酸、熱原、內毒素等雜質,使后面的分離純化簡單了。從這個角度上講,包含體的形成對分離純化亦有好處。

3:酶溶破碎法
      酶解是利用溶解細胞壁的酶處理菌體細胞,使細胞壁受到部分或完全破壞后,再利用滲透壓沖擊等方法破壞細胞膜,進一步增大胞內產物的通透性。溶菌酶(lysozyme)適用于革蘭氏陰性菌細胞的分解,應用于革蘭氏陽性菌時,需輔以EDTA使之更有效地作用于細胞壁。 真核細胞的細胞壁不同于原核細胞,需采用不同的酶。

4:滲透壓沖擊破碎法
       滲透壓沖擊是較溫和的一種破碎方法,將細胞放在高滲透壓的溶液中(如一定濃度的甘油或蔗糖溶液),由于滲透壓的作用,細胞內水分便向外滲出,細胞發生收縮,當達到平衡后,將介質快速稀釋,或將細胞轉入水或緩沖液中,由于滲透壓的突然變化,胞外的水迅速滲入胞內,引起細胞快速膨脹而破裂。

5:凍融破碎法
      將細胞放在低溫下冷凍(約-15℃),然后在室溫中融化,反復多次而達到破壁作用。由于冷凍,一方面能使細胞膜的疏水鍵結構破裂,從而增加細胞的親水性能,另一方面胞內水結晶,形成冰晶粒,引起細胞膨脹而破裂。對于細胞壁較脆弱的菌體,可采用此法。

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